Szybki test na ślinie do ilościowej oceny subklinicznego rezerwuaru zakaźnego pasożyta malarii

W obliczu nieustannego wzrostu COVID-19 niewystarczająca zdolność testów diagnostycznych zagraża kontroli rozprzestrzeniania się choroby. Ze względu na scentralizowane ustawienia i długi czas realizacji, reakcja łańcuchowa polimerazy z odwrotną transkrypcją w czasie rzeczywistym (RT-PCR w czasie rzeczywistym), złoty standard wykrywania wirusów, nie zdołał na czas odzwierciedlić status quo epidemii podczas pilnej epidemii.

W związku z tym konieczne jest szybkie narzędzie do badań przesiewowych, aby pomóc powstrzymać rozprzestrzenianie się COVID-19 w krajach, w których szczepionki nie są szeroko stosowane. W tej pracy proponujemy test antygenu COVID-19 na bazie śliny z wykorzystaniem elektrycznego biosensora opartego na tranzystorze polowym z podwójną warstwą (EDL) (BioFET). Wykrywanie białka nukleokapsydu (N) SARS-CoV-2 jest walidowane z limitami wykrywalności (LoDs) wynoszącymi odpowiednio 0,34 ng/mL (7,44 pM) i 0,14 ng/mL (2,96 pM) w 1x PBS i sztucznej ślinie.

Swoistość jest sprawdzana za pomocą typów antygenów wykazujących niską reaktywność krzyżową wśród MERS-CoV, wirusa grypy A i wirusa grypy B.

• Ten przenośny system jest wyposażony w komunikację Bluetooth i przyjazne dla użytkownika interfejsy, które są w pełni kompatybilne z cyfrowym zdrowiem, co w praktyce prowadzi do naprawy na miejscu, skutecznego zarządzania i proaktywnej reakcji ze strony lekarzy i pracowników służby zdrowia.
• SARS-CoV-2 infekuje kilka gatunków zwierząt, a warianty SARS-CoV-2 będące przedmiotem obaw (VOC) mogą nawet wykazywać (jak u ludzi) zwiększone szybkości przenoszenia międzygatunkowego i wewnątrzgatunkowego. Skorelowaliśmy dane dotyczące czułości szybkich testów antygenowych SARS-CoV-2 (RAT) z równoważnikami genomu wirusowego RNA analizowanymi za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy z odwrotną transkryptazą w czasie rzeczywistym (RT-PCR) .
• Ponadto sprawdziliśmy ich przydatność do testowania zwierząt, oceniając działanie śliny i LZO. Wirusy do 2 log (liczba kopii RNA) poniżej hipotetycznego progu zakaźności SARS-CoV-2 zostały wykryte przez większość analizowanych RAT.
• Jednakże, podczas gdy ślina różnych gatunków zwierząt generalnie nie wykazywała niekorzystnego wpływu na czułość analityczną RAT, wykrycie LZO B.1.1.7 i B.1.351 było w niektórych RAT gorsze od wirusów innych niż LZO.
• Szybka identyfikacja i izolacja osób zakażonych SARS-CoV-2 ma kluczowe znaczenie. Ostatnie badania wykazały, że RT-PCR z samodzielnie pobranej śliny jest odpowiednią alternatywą dla wymazu z nosogardzieli. Wadą RT-PCR jest długi czas do uzyskania wyniku, który może być problematyczny.
• Aby rozwiązać ten problem, w tym badaniu oceniono szybki test antygenowy CE, certyfikowany do wykrywania SARS-CoV-2 przy użyciu śliny (COVID-19 Antigen Test Cassette (nadwrażliwe złoto koloidalne).
• Wykazano ogólną czułość szybkiego testu antygenowego śliny wynoszącą 44,4% i swoistość 100% w porównaniu z wynikami RT-PCR z roztworu płukania gardła jako złotego standardu. Dane sugerują, że szybkie testy antygenowe oparte na ślinie do wykrywania SARS-CoV-2 nie są niezawodnym substytutem RT-PCR

Duża część trwającego przenoszenia pasożyta malarii przypisywana jest subklinicznym infekcjom o małej gęstości, które nie są łatwo wykrywane za pomocą dostępnych szybkich testów diagnostycznych (RDT) lub mikroskopii.

Przenoszenie gametocytów Plasmodium falciparum  jest subkliniczne, ale rezerwuarem pasożytów są osobniki z gametocytemią, które prowadzą do infekcji komarów i miejscowej transmisji. Skuteczne wykrywanie i oznaczanie ilościowe tych nosicieli może pomóc w rozwoju strategii eliminacji malarii. Nie istnieją jednak żadne badania RDT w miejscu potrzeby (PON) do wykrywania gametocytów, a tym bardziej takie, które mogą wykonywać nieinwazyjne pobieranie próbek śliny poza środowiskiem klinicznym.

W tym miejscu informujemy o odkryciu 35 markerów pasożytniczych, z których wybraliśmy jednego kandydata do zastosowania w PON RDT. Przeprowadziliśmy przekrojowe, multiomiczne badanie śliny od 364 dzieci z subkliniczną infekcją w Kamerunie i Zambii oraz stworzyliśmy prototyp testu immunologicznego PON bocznego przepływu na ślinie dla   nosicieli gametocytów P. falciparum . Test jest w stanie zidentyfikować nosicielstwo submikroskopowe zarówno w warunkach klinicznych, jak i nieklinicznych i jest kompatybilny z archiwalnymi próbkami śliny.

Istnieje pilna potrzeba niedrogiego oznaczania liczby CD4 w celu monitorowania choroby HIV.