Ocena immunotoksyczności dla nowego inhibitora kinazy tyrozynowej śledziony R406.
-
- Kinaza tyrozynowa Cdna 8Spleen (Syk) to nowy cel farmaceutyczny w leczeniu chorób alergicznych, autoimmunologicznych i nowotworowych. Wcześniejsze badania wykazały, że sygnalizacja Syk odgrywa kluczową rolę w regulacji układu limfohematopoetycznego.
- Obserwacje te skłoniły nas do zbadania, czy hamowanie Syk będzie promować immunotoksyczność. W serii badań szczurom podawano doustnie R406 w dawkach do 100 mg/kg/dobę włącznie (lub jego prolek R788 w dawkach do 100 mg/kg/dobę włącznie, zmniejszonych do 50 mg/dobę). kg/dzień dla kobiet po przekroczeniu MTD), silnym inhibitorem Syk, dwa razy dziennie przez 28 dni.
- Oprócz standardowych ocen toksykologicznych przeprowadzono immunofenotypowanie metodą cytometrii przepływowej oraz badanie humoralnej odpowiedzi immunologicznej mierząc poziomy przeciwciał IgM i IgG anty – KLH . Inne badania immunotoksyczności obejmowały trzy modele oporności żywiciela u samic myszy Balb/c w celu dalszego ustalenia wpływu R406 na odporność wrodzoną i nabytą.
- Po leczeniu R406 w badaniach na szczurach zaobserwowano oczekiwane działanie immunomodulujące (np. zmniejszenie masy grasicy i śledziony, ubytek komórek szpiku kostnego i zmniejszenie liczby limfocytów, w tym limfocytów T i B) .
- Zmiany te zasadniczo ustąpiły podczas 14-dniowego okresu rekonwalescencji bez leczenia. Prowokacja KLH u szczurów wykazała brak niekorzystnego wpływu na odpowiedź IgG lub IgM . R788/406, podawany doustnie w dawkach do 80 mg/kg/dobę włącznie przez 28 dni, nie wpływał na klirens bakterii lub wirusów odpowiednio w mysich modelach oporności u gospodarzy Listeria, paciorkowce lub grypa.
- Korelowało to z wcześniejszymi testami funkcji makrofagów i neutrofili in vitro (ocena jonów migrujących, fagocytozy, wybuchu oksydacyjnego i aktywności bakteriobójczej), które wykazały, że R406 nie wpływa niekorzystnie na funkcję makrofagów lub neutrofili we wrodzonych odpowiedziach immunologicznych.
- Podsumowując, wyniki te pokazują , że R406 ma minimalną funkcjonalną immunotoksyczność pomimo jego działania limfocytopenicznego, co sugeruje, że hamowanie Syk może nie prowadzić do niedopuszczalnych działań niepożądanych opartych na mechanizmach.
Aby przetestować możliwość, że IL-10 działa jako autokrynny lub parakrynny czynnik wzrostu dla komórek B Ly-1, leczyliśmy myszy nieprzerwanie od urodzenia do 8 tygodnia życia monoklonalnym szczurzym przeciwciałem IgM , które specyficznie neutralizuje mysią IL-10. Myszy leczone w ten sposób pozbawione były komórek Ly-1 B rezydujących w otrzewnej, zawierały znacznie obniżone poziomy immunoglobulin M w surowicy i nie były w stanie wytworzyć znaczących odpowiedzi przeciwciał in vivo na wstrzyknięcia dootrzewnowe alfa 1,3-dekstranu lub fosforylocholiny, anty genów, dla których specyficzne komórki B znajdują się w podzbiorze komórek B Ly-1.
W przeciwieństwie do tego, konwencjonalne komórki B śledziony myszy traktowanych anty -IL-10 były prawidłowe pod względem całkowitej liczby, fenotypu i odpowiedzi in vitro na mitogeny komórek B i zależną od grasicy antygen trinitrofenylo-hemocyjaninę skałoczepa (TNP- KLH ). ).
Mechanizm deplecji limfocytów B Ly-1 wydaje się być związany z podwyższeniem poziomów endogennego interferonu gamma (IFN-gamma) u myszy leczonych anty-IL-10, ponieważ współadministrowali neutralizujące przeciwciała anty-IFN-gamma subst anty – IL- 10 . alli przywrócił liczbę limfocytów B Ly-1 rezydujących w otrzewnej u tych myszy. Wyniki te sugerują, że IL-10 jest regulatorem rozwoju limfocytów B Ly-1 i identyfikują procedurę specyficznego zubażania limfocytów B Ly-1, umożliwiając w ten sposób dalszą ocenę roli tych komórek w układzie odpornościowym.
Ocena immunotoksyczności dla nowego inhibitora kinazy tyrozynowej śledziony R406.
Kinaza tyrozynowa śledziony (Syk) to nowy cel farmaceutyczny w leczeniu schorzeń alergicznych, autoimmunologicznych i nowotworowych. Wcześniejsze badania wykazały, że sygnalizacja Syk odgrywa kluczową rolę w regulacji układu limfohematopoetycznego. Obserwacje te skłoniły nas do zbadania, czy hamowanie Syk będzie promować immunotoksyczność.
W serii badań szczurom podawano doustnie R406 w dawkach do 100 mg/kg/dobę włącznie (lub jego prolek R788 w dawkach do 100 mg/kg/dobę włącznie, zmniejszonych do 50 mg/dobę). kg/dzień dla kobiet po przekroczeniu MTD), silnym inhibitorem Syk, dwa razy dziennie przez 28 dni.
Oprócz standardowych ocen toksykologicznych przeprowadzono immunofenotypowanie metodą cytometrii przepływowej oraz badanie humoralnej odpowiedzi immunologicznej mierząc poziomy przeciwciał IgM i IgG anty – KLH . Inne badania immunotoksyczności obejmowały trzy modele oporności żywiciela u samic myszy Balb/c w celu dalszego ustalenia wpływu R406 na odporność wrodzoną i nabytą.
Po leczeniu R406 w badaniach na szczurach zaobserwowano oczekiwane działanie immunomodulujące (np. zmniejszenie masy grasicy i śledziony, ubytek komórek szpiku kostnego i zmniejszenie liczby limfocytów, w tym limfocytów T i B) . Zmiany te zasadniczo ustąpiły po 14-dniowym okresie rekonwalescencji bez leczenia . Prowokacja KLH u szczurów wykazała brak niekorzystnego wpływu na odpowiedź IgG lub IgM . R788/406, podawany doustnie w dawkach do 80 mg/kg/dobę włącznie przez 28 dni, nie wpływał na klirens bakterii lub wirusów odpowiednio w mysich modelach oporności u gospodarzy Listeria, paciorkowce lub grypa.
Human IgM Standards A-F |
|||
F171 | Cygnus Technologies | 1 ml | 585.6 EUR |
Mouse IgM Standards Set, A-F |
|||
F093 | Cygnus Technologies | 1 ml | 493.2 EUR |
Vaccigel Alum adjuvant adsorbed with Keyhole limpet hemocyanin (KLH @1 mg/ml), Vaccine adjuvant |
|||
AV-1010-KLH | Alpha Diagnostics | 1 ml | 343.2 EUR |
Rat Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
DLR-IgM-Ra-48T | DL Develop | 48T | 511.2 EUR |
Rat Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
DLR-IgM-Ra-96T | DL Develop | 96T | 658.8 EUR |
Rat Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
RD-IgM-Ra-48Tests | Reddot Biotech | 48 Tests | 502.8 EUR |
Rat Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
RD-IgM-Ra-96Tests | Reddot Biotech | 96 Tests | 692.4 EUR |
Rat Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
RDR-IgM-Ra-48Tests | Reddot Biotech | 48 Tests | 524.4 EUR |
Rat Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
RDR-IgM-Ra-96Tests | Reddot Biotech | 96 Tests | 723.6 EUR |
Rabbit Polyclonal antibody Anti-CRBN |
|||
Anti-CRBN | ImmunoStep | 50 µg | 418.8 EUR |
Mouse Anti-Meningococcal A/C/W/Y Oligosaccharides IgM (Combo) ELISA Kit, 96 tests, Quantitative |
|||
600-889-IGM | Alpha Diagnostics | 1 Kit | 1074 EUR |
EXOCET Standards |
|||
EXOCET-SD-1 | SBI | each | 242.4 EUR |
Mouse Keyhole Limpet Hemocyanin (KLH IgM) ELISA Kit |
|||
abx053480-96tests | Abbexa | 96 tests | 801.6 EUR |
Human Anti-Meningococcal Group A/C/W/Y Oligosaccharides IgM (Combo) ELISA Kit, 96 tests, Quantitative |
|||
600-884-IGM | Alpha Diagnostics | 1 Kit | 1220.4 EUR |
Mouse Anti KLH McAb |
|||
E61I01501 | EnoGene | 100ug | 411.6 EUR |
Anti-MTAP Antibody (KLH) |
|||
STJ503536 | St John's Laboratory | 100 µg | 703.2 EUR |
Anti-Flag antibody (KLH) |
|||
STJ98077 | St John's Laboratory | 100 µl | 280.8 EUR |
Anti-BNP antibody (KLH) |
|||
STJ97879 | St John's Laboratory | 100 µl | 280.8 EUR |
Anti-BNP antibody (KLH) |
|||
STJ97880 | St John's Laboratory | 100 µl | 280.8 EUR |
Anti-BNP antibody (KLH) |
|||
STJ97881 | St John's Laboratory | 100 µl | 280.8 EUR |
Anti-Calnexin antibody (KLH) |
|||
STJ97891 | St John's Laboratory | 100 µl | 280.8 EUR |
Anti-Calregulin antibody (KLH) |
|||
STJ97892 | St John's Laboratory | 100 µl | 280.8 EUR |
Anti-cAMP antibody (KLH) |
|||
STJ97893 | St John's Laboratory | 100 µl | 280.8 EUR |
Anti-CD20 antibody (KLH) |
|||
STJ97914 | St John's Laboratory | 100 µl | 280.8 EUR |
Anti-Clenbuterol antibody (KLH) |
|||
STJ97960 | St John's Laboratory | 100 µl | 280.8 EUR |
Bovine Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
DLR-IgM-b-48T | DL Develop | 48T | 547.2 EUR |
Bovine Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
DLR-IgM-b-96T | DL Develop | 96T | 708 EUR |
Chicken Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
DLR-IgM-Ch-48T | DL Develop | 48T | 511.2 EUR |
Chicken Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
DLR-IgM-Ch-96T | DL Develop | 96T | 658.8 EUR |
Human Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
DLR-IgM-Hu-48T | DL Develop | 48T | 484.8 EUR |
Human Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
DLR-IgM-Hu-96T | DL Develop | 96T | 621.6 EUR |
Mouse Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
DLR-IgM-Mu-48T | DL Develop | 48T | 493.2 EUR |
Mouse Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
DLR-IgM-Mu-96T | DL Develop | 96T | 633.6 EUR |
Rabbit Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
DLR-IgM-Rb-48T | DL Develop | 48T | 609.6 EUR |
Rabbit Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
DLR-IgM-Rb-96T | DL Develop | 96T | 793.2 EUR |
Bovine Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
RD-IgM-b-48Tests | Reddot Biotech | 48 Tests | 543.6 EUR |
Bovine Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
RD-IgM-b-96Tests | Reddot Biotech | 96 Tests | 750 EUR |
Bovine Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
RDR-IgM-b-48Tests | Reddot Biotech | 48 Tests | 567.6 EUR |
Bovine Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
RDR-IgM-b-96Tests | Reddot Biotech | 96 Tests | 784.8 EUR |
Chicken Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
RDR-IgM-Ch-48Tests | Reddot Biotech | 48 Tests | 524.4 EUR |
Chicken Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
RDR-IgM-Ch-96Tests | Reddot Biotech | 96 Tests | 723.6 EUR |
Human Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
RDR-IgM-Hu-48Tests | Reddot Biotech | 48 Tests | 493.2 EUR |
Human Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
RDR-IgM-Hu-96Tests | Reddot Biotech | 96 Tests | 678 EUR |
Mouse Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
RDR-IgM-Mu-48Tests | Reddot Biotech | 48 Tests | 502.8 EUR |
Mouse Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
RDR-IgM-Mu-96Tests | Reddot Biotech | 96 Tests | 693.6 EUR |
Rabbit Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
RDR-IgM-Rb-48Tests | Reddot Biotech | 48 Tests | 640.8 EUR |
Rabbit Immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit |
|||
RDR-IgM-Rb-96Tests | Reddot Biotech | 96 Tests | 890.4 EUR |
Human Anti-Keyhole limpet hemocyanin (KLH) IgM ELISA Kit, 96 tests, Quantitative |
|||
700-145-KLM | Alpha Diagnostics | 1 Kit | 927.6 EUR |
Mouse Anti-Keyhole limpet hemocyanin (KLH) IgM ELISA Kit, 96 tests, Quantitative |
|||
700-155-VAM | Alpha Diagnostics | 1 Kit | 854.4 EUR |
Monkey Anti-Keyhole limpet hemocyanin (KLH) IgM ELISA Kit, 96 tests, Quantitative |
|||
700-180-KLM | Alpha Diagnostics | 1 Kit | 927.6 EUR |
Canine Anti-Keyhole limpet hemocyanin (KLH) IgM ELISA Kit, 96 tests, Quantitative |
|||
700-190-KLM | Alpha Diagnostics | 1 Kit | 927.6 EUR |
Rat anti Mouse IgM |
|||
41R-1116 | Fitzgerald | 100 ug | 318 EUR |
Mouse anti Rat IgM |
|||
41R-1122 | Fitzgerald | 100 ug | 318 EUR |
Mouse anti Rat IgM |
|||
41R-1123 | Fitzgerald | 100 ug | 318 EUR |
Rabbit anti Rat IgM |
|||
40C-CB1264 | Fitzgerald | 2 mg | 342 EUR |
Goat anti Rat IgM |
|||
40C-CB1271 | Fitzgerald | 1 mg | 435.6 EUR |
Rat(anti-CMV IgM) |
|||
QY-E11747 | Qayee Biotechnology | 96T | 448.8 EUR |
Human keyhole limpet hemocyanin(KLH) antibody(IgM) ELISA Kit |
|||
CSB-E16534h-24T | Cusabio | 1 plate of 24 wells | 198 EUR |
Human keyhole limpet hemocyanin(KLH) antibody(IgM) ELISA Kit |
|||
1-CSB-E16534h | Cusabio |
|
|
Mouse keyhole limpet hemocyanin (KLH) antibody (IgM) ELISA kit |
|||
CSB-E13375m-24T | Cusabio | 1 plate of 24 wells | 198 EUR |
Mouse keyhole limpet hemocyanin (KLH) antibody (IgM) ELISA kit |
|||
1-CSB-E13375m | Cusabio |
|
|
Rat KLH ELISA Kit |
|||
ERK0075 | Abclonal | 96Tests | 625.2 EUR |
Lyophilized Exosome Standards |
|||
ExoA375 | ImmunoStep | 100 μg | 364.2 EUR |
Lyophilized Exosome Standards |
|||
ExoHT29 | ImmunoStep | 100 μg | 364.2 EUR |
Lyophilized Exosome Standards |
|||
ExoMCF7 | ImmunoStep | 100 μg | 364.2 EUR |
Lyophilized Exosome Standards |
|||
ExoPC3 | ImmunoStep | 100 μg | 364.2 EUR |
Lyophilized Exosome Standards |
|||
ExoPLASMA | ImmunoStep | 100 μg | 364.2 EUR |
Lyophilized Exosome Standards |
|||
ExoUrine | ImmunoStep | 100 μg | 364.2 EUR |
Density Standards 6ml |
|||
DEN1012 | Scientific Laboratory Supplies | PK10 | 69.31 EUR |
Chlorine meter standards |
|||
WAT1076 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 269.04 EUR |
Human Anti-Keyhole limpet hemocyanin (KLH) IgG+IgM ELISA Kit, 96 tests, Quantitative |
|||
700-135-KGM | Alpha Diagnostics | 1 kit | 927.6 EUR |
Bovine/Cow Anti-Keyhole limpet hemocyanin (KLH) IgM ELISA Kit, 96 tests, Quantitative |
|||
700-205-KLM | Alpha Diagnostics | 1 Kit | 854.4 EUR |
Anti-Myc-tag antibody (KLH) |
|||
STJ90105 | St John's Laboratory | 200 µl | 236.4 EUR |
Anti-His-tag antibody (KLH) |
|||
STJ90106 | St John's Laboratory | 200 µl | 236.4 EUR |
Anti-HA-tag antibody (KLH) |
|||
STJ90107 | St John's Laboratory | 200 µl | 236.4 EUR |
Anti-FLAG-tag antibody (KLH) |
|||
STJ90108 | St John's Laboratory | 200 µl | 236.4 EUR |
Anti-E alpha antibody (KLH) |
|||
STJ98053 | St John's Laboratory | 100 µl | 280.8 EUR |
Anti-Ki-67 antibody (KLH) |
|||
STJ98194 | St John's Laboratory | 100 µl | 280.8 EUR |
Anti-Ki-67 antibody (KLH) |
|||
STJ98195 | St John's Laboratory | 100 µl | 280.8 EUR |
Anti-PARP-1 antibody (KLH) |
|||
STJ98308 | St John's Laboratory | 100 µl | 280.8 EUR |
Anti-Actin beta antibody (KLH) |
|||
STJ97814 | St John's Laboratory | 100 µl | 280.8 EUR |
Anti-Bcl-2 antibody (KLH) |
|||
STJ97860 | St John's Laboratory | 100 µl | 280.8 EUR |
Custom production of antibodies in 5 Rats using customer supplied antigen (std 63 days protocol) |
|||
RAT-5 | Alpha Diagnostics | 1 | 1365.6 EUR |
Rabbit anti Rat IgM (FITC) |
|||
43C-CB1265 | Fitzgerald | 1.5 mg | 346.8 EUR |
Rabbit anti Rat IgM (rhodamine) |
|||
43C-CB1266 | Fitzgerald | 1.5 mg | 363.6 EUR |
Rabbit anti Rat IgM (biotin) |
|||
43C-CB1268 | Fitzgerald | 1.5 mg | 441.6 EUR |
Rabbit anti Rat IgM (HRP) |
|||
43C-CB1269 | Fitzgerald | 1.5 mg | 478.8 EUR |
Goat anti Rat IgM (FITC) |
|||
43C-CB1272 | Fitzgerald | 1 mg | 436.8 EUR |
Goat anti Rat IgM (rhodamine) |
|||
43C-CB1273 | Fitzgerald | 1 mg | 482.4 EUR |
Goat anti Rat IgM (biotin) |
|||
43C-CB1275 | Fitzgerald | 1 mg | 466.8 EUR |
Goat anti Rat IgM (HRP) |
|||
43C-CB1276 | Fitzgerald | 1 mg | 534 EUR |
Mouse anti Rat IgM (HRP) |
|||
43R-1632 | Fitzgerald | 100 ug | 338.4 EUR |
Mouse anti Rat IgM (HRP) |
|||
43R-1633 | Fitzgerald | 100 ug | 338.4 EUR |
Goat anti-Rat IgM Antibody |
|||
abx401442-05mg | Abbexa | 0.5 mg | 444 EUR |
Goat Anti-Rat IgM-AP |
|||
LF-SA8011AP | Abfrontier | 1.0 ml | 423.6 EUR |
Goat Anti-Rat IgM-BIOT |
|||
LF-SA8011B | Abfrontier | 1.0 mg | 374.4 EUR |
Goat Anti-Rat IgM-FITC |
|||
LF-SA8011F | Abfrontier | 1.0 mg | 328.8 EUR |
Goat Anti-Rat IgM-HRP |
|||
LF-SA8011H | Abfrontier | 1.0 ml | 336 EUR |
Goat Anti-Rat IgM-PE |
|||
LF-SA8011P | Abfrontier | 0.5 mg | 524.4 EUR |
Goat Anti-Rat IgM-TXRD |
|||
LF-SA8011T | Abfrontier | 1.0 mg | 294 EUR |
Korelowało to z wcześniejszymi testami funkcji makrofagów i neutrofili in vitro (ocena jonów migrujących, fagocytozy, wybuchu oksydacyjnego i aktywności bakteriobójczej), które wykazały, że R406 nie wpływa niekorzystnie na funkcję makrofagów lub neutrofili we wrodzonych odpowiedziach immunologicznych. Podsumowując, wyniki te pokazują , że R406 ma minimalną funkcjonalną immunotoksyczność pomimo jego działania limfocytopenicznego, co sugeruje, że hamowanie Syk może nie prowadzić do niedopuszczalnych działań niepożądanych opartych na mechanizmach.