Ocena immunotoksyczności dla nowego inhibitora kinazy tyrozynowej śledziony R406.

• • Kinaza tyrozynowa Cdna 8Spleen (Syk) to nowy cel farmaceutyczny w leczeniu chorób alergicznych, autoimmunologicznych i nowotworowych. Wcześniejsze badania wykazały, że sygnalizacja Syk odgrywa kluczową rolę w regulacji układu limfohematopoetycznego.
  • Obserwacje te skłoniły nas do zbadania, czy hamowanie Syk będzie promować immunotoksyczność. W serii badań  szczurom  podawano doustnie R406 w dawkach do 100 mg/kg/dobę włącznie (lub jego prolek R788 w dawkach do 100 mg/kg/dobę włącznie, zmniejszonych do 50 mg/dobę). kg/dzień dla kobiet po przekroczeniu MTD), silnym inhibitorem Syk, dwa razy dziennie przez 28 dni.
  • Oprócz  standardowych  ocen toksykologicznych przeprowadzono immunofenotypowanie metodą cytometrii przepływowej oraz badanie humoralnej odpowiedzi immunologicznej mierząc  poziomy przeciwciał IgM  i IgG anty – KLH .  Inne badania immunotoksyczności obejmowały trzy modele oporności żywiciela u samic myszy Balb/c w celu dalszego ustalenia wpływu R406 na odporność wrodzoną i nabytą.
  • Po leczeniu R406 w badaniach na szczurach zaobserwowano oczekiwane działanie immunomodulujące (np. zmniejszenie masy grasicy i śledziony, ubytek komórek szpiku kostnego i zmniejszenie liczby limfocytów, w tym limfocytów T i B)   .
  • Zmiany te zasadniczo ustąpiły podczas 14-dniowego okresu rekonwalescencji bez leczenia. Prowokacja  KLH  u  szczurów  wykazała brak niekorzystnego wpływu na odpowiedź IgG lub  IgM  . R788/406, podawany doustnie w dawkach do 80 mg/kg/dobę włącznie przez 28 dni, nie wpływał na klirens bakterii lub wirusów odpowiednio w mysich modelach oporności u gospodarzy Listeria, paciorkowce lub grypa.
  • Korelowało to z wcześniejszymi testami funkcji makrofagów i neutrofili in vitro (ocena jonów migrujących, fagocytozy, wybuchu oksydacyjnego i aktywności bakteriobójczej), które wykazały, że R406 nie wpływa niekorzystnie na funkcję makrofagów lub neutrofili we wrodzonych odpowiedziach immunologicznych.
  • Podsumowując, wyniki te pokazują , że R406 ma minimalną funkcjonalną immunotoksyczność pomimo jego działania limfocytopenicznego, co sugeruje, że hamowanie Syk może nie prowadzić do niedopuszczalnych działań niepożądanych opartych na mechanizmach.

Aby przetestować możliwość, że IL-10 działa jako autokrynny lub parakrynny czynnik wzrostu dla komórek B Ly-1, leczyliśmy myszy nieprzerwanie od urodzenia do 8 tygodnia życia monoklonalnym  szczurzym  przeciwciałem IgM  , które specyficznie neutralizuje mysią IL-10. Myszy leczone w ten sposób pozbawione były komórek Ly-1 B rezydujących w otrzewnej, zawierały znacznie obniżone poziomy immunoglobulin M w surowicy i nie były w stanie wytworzyć znaczących odpowiedzi przeciwciał in vivo  na wstrzyknięcia dootrzewnowe alfa 1,3-dekstranu lub fosforylocholiny,  anty genów, dla których specyficzne komórki B znajdują się w podzbiorze komórek B Ly-1.

W przeciwieństwie do tego, konwencjonalne komórki B śledziony  myszy traktowanych anty -IL-10 były prawidłowe pod względem całkowitej liczby, fenotypu i odpowiedzi in vitro na mitogeny komórek B i zależną od grasicy  antygen trinitrofenylo-hemocyjaninę skałoczepa (TNP- KLH ). ).

Mechanizm deplecji limfocytów B Ly-1 wydaje się być związany z podwyższeniem poziomów endogennego interferonu gamma (IFN-gamma) u  myszy leczonych anty-IL-10, ponieważ współadministrowali neutralizujące przeciwciała  anty-IFN-gamma subst anty – IL-  10 . alli przywrócił liczbę limfocytów B Ly-1 rezydujących w otrzewnej u tych myszy. Wyniki te sugerują, że IL-10 jest regulatorem rozwoju limfocytów B Ly-1 i identyfikują procedurę specyficznego zubażania limfocytów B Ly-1, umożliwiając w ten sposób dalszą ocenę roli tych komórek w układzie odpornościowym.

Ocena immunotoksyczności dla nowego inhibitora kinazy tyrozynowej śledziony R406.

Kinaza tyrozynowa śledziony (Syk) to nowy cel farmaceutyczny w leczeniu schorzeń alergicznych, autoimmunologicznych i nowotworowych. Wcześniejsze badania wykazały, że sygnalizacja Syk odgrywa kluczową rolę w regulacji układu limfohematopoetycznego. Obserwacje te skłoniły nas do zbadania, czy hamowanie Syk będzie promować immunotoksyczność.

W serii badań  szczurom  podawano doustnie R406 w dawkach do 100 mg/kg/dobę włącznie (lub jego prolek R788 w dawkach do 100 mg/kg/dobę włącznie, zmniejszonych do 50 mg/dobę). kg/dzień dla kobiet po przekroczeniu MTD), silnym inhibitorem Syk, dwa razy dziennie przez 28 dni.

Oprócz standardowych ocen toksykologicznych przeprowadzono immunofenotypowanie metodą cytometrii przepływowej oraz badanie humoralnej odpowiedzi immunologicznej mierząc  poziomy przeciwciał IgM  i IgG anty – KLH .  Inne badania immunotoksyczności obejmowały trzy modele oporności żywiciela u samic myszy Balb/c w celu dalszego ustalenia wpływu R406 na odporność wrodzoną i nabytą.

Po leczeniu R406 w badaniach na szczurach zaobserwowano oczekiwane działanie immunomodulujące (np. zmniejszenie masy grasicy i śledziony, ubytek komórek szpiku kostnego i zmniejszenie liczby limfocytów, w tym limfocytów T i B)   . Zmiany te zasadniczo ustąpiły po 14-dniowym okresie rekonwalescencji bez leczenia . Prowokacja  KLH  u  szczurów  wykazała brak niekorzystnego wpływu na odpowiedź IgG lub  IgM  . R788/406, podawany doustnie w dawkach do 80 mg/kg/dobę włącznie przez 28 dni, nie wpływał na klirens bakterii lub wirusów odpowiednio w mysich modelach oporności u gospodarzy Listeria, paciorkowce lub grypa.

Korelowało to z wcześniejszymi testami funkcji makrofagów i neutrofili in vitro (ocena jonów migrujących, fagocytozy, wybuchu oksydacyjnego i aktywności bakteriobójczej), które wykazały, że R406 nie wpływa niekorzystnie na funkcję makrofagów lub neutrofili we wrodzonych odpowiedziach immunologicznych. Podsumowując, wyniki te pokazują , że R406 ma minimalną funkcjonalną immunotoksyczność pomimo jego działania limfocytopenicznego, co sugeruje, że hamowanie Syk może nie prowadzić do niedopuszczalnych działań niepożądanych opartych na mechanizmach.