Ocena immunotoksyczności dla nowego inhibitora kinazy tyrozynowej śledziony R406.
-
- Kinaza tyrozynowa Cdna 8Spleen (Syk) to nowy cel farmaceutyczny w leczeniu chorób alergicznych, autoimmunologicznych i nowotworowych. Wcześniejsze badania wykazały, że sygnalizacja Syk odgrywa kluczową rolę w regulacji układu limfohematopoetycznego.
- Obserwacje te skłoniły nas do zbadania, czy hamowanie Syk będzie promować immunotoksyczność. W serii badań szczurom podawano doustnie R406 w dawkach do 100 mg/kg/dobę włącznie (lub jego prolek R788 w dawkach do 100 mg/kg/dobę włącznie, zmniejszonych do 50 mg/dobę). kg/dzień dla kobiet po przekroczeniu MTD), silnym inhibitorem Syk, dwa razy dziennie przez 28 dni.
- Oprócz standardowych ocen toksykologicznych przeprowadzono immunofenotypowanie metodą cytometrii przepływowej oraz badanie humoralnej odpowiedzi immunologicznej mierząc poziomy przeciwciał IgM i IgG anty – KLH . Inne badania immunotoksyczności obejmowały trzy modele oporności żywiciela u samic myszy Balb/c w celu dalszego ustalenia wpływu R406 na odporność wrodzoną i nabytą.
- Po leczeniu R406 w badaniach na szczurach zaobserwowano oczekiwane działanie immunomodulujące (np. zmniejszenie masy grasicy i śledziony, ubytek komórek szpiku kostnego i zmniejszenie liczby limfocytów, w tym limfocytów T i B) .
- Zmiany te zasadniczo ustąpiły podczas 14-dniowego okresu rekonwalescencji bez leczenia. Prowokacja KLH u szczurów wykazała brak niekorzystnego wpływu na odpowiedź IgG lub IgM . R788/406, podawany doustnie w dawkach do 80 mg/kg/dobę włącznie przez 28 dni, nie wpływał na klirens bakterii lub wirusów odpowiednio w mysich modelach oporności u gospodarzy Listeria, paciorkowce lub grypa.
- Korelowało to z wcześniejszymi testami funkcji makrofagów i neutrofili in vitro (ocena jonów migrujących, fagocytozy, wybuchu oksydacyjnego i aktywności bakteriobójczej), które wykazały, że R406 nie wpływa niekorzystnie na funkcję makrofagów lub neutrofili we wrodzonych odpowiedziach immunologicznych.
- Podsumowując, wyniki te pokazują , że R406 ma minimalną funkcjonalną immunotoksyczność pomimo jego działania limfocytopenicznego, co sugeruje, że hamowanie Syk może nie prowadzić do niedopuszczalnych działań niepożądanych opartych na mechanizmach.
Aby przetestować możliwość, że IL-10 działa jako autokrynny lub parakrynny czynnik wzrostu dla komórek B Ly-1, leczyliśmy myszy nieprzerwanie od urodzenia do 8 tygodnia życia monoklonalnym szczurzym przeciwciałem IgM , które specyficznie neutralizuje mysią IL-10. Myszy leczone w ten sposób pozbawione były komórek Ly-1 B rezydujących w otrzewnej, zawierały znacznie obniżone poziomy immunoglobulin M w surowicy i nie były w stanie wytworzyć znaczących odpowiedzi przeciwciał in vivo na wstrzyknięcia dootrzewnowe alfa 1,3-dekstranu lub fosforylocholiny, anty genów, dla których specyficzne komórki B znajdują się w podzbiorze komórek B Ly-1.
W przeciwieństwie do tego, konwencjonalne komórki B śledziony myszy traktowanych anty -IL-10 były prawidłowe pod względem całkowitej liczby, fenotypu i odpowiedzi in vitro na mitogeny komórek B i zależną od grasicy antygen trinitrofenylo-hemocyjaninę skałoczepa (TNP- KLH ). ).
Mechanizm deplecji limfocytów B Ly-1 wydaje się być związany z podwyższeniem poziomów endogennego interferonu gamma (IFN-gamma) u myszy leczonych anty-IL-10, ponieważ współadministrowali neutralizujące przeciwciała anty-IFN-gamma subst anty – IL- 10 . alli przywrócił liczbę limfocytów B Ly-1 rezydujących w otrzewnej u tych myszy. Wyniki te sugerują, że IL-10 jest regulatorem rozwoju limfocytów B Ly-1 i identyfikują procedurę specyficznego zubażania limfocytów B Ly-1, umożliwiając w ten sposób dalszą ocenę roli tych komórek w układzie odpornościowym.
Ocena immunotoksyczności dla nowego inhibitora kinazy tyrozynowej śledziony R406.
Kinaza tyrozynowa śledziony (Syk) to nowy cel farmaceutyczny w leczeniu schorzeń alergicznych, autoimmunologicznych i nowotworowych. Wcześniejsze badania wykazały, że sygnalizacja Syk odgrywa kluczową rolę w regulacji układu limfohematopoetycznego. Obserwacje te skłoniły nas do zbadania, czy hamowanie Syk będzie promować immunotoksyczność.
W serii badań szczurom podawano doustnie R406 w dawkach do 100 mg/kg/dobę włącznie (lub jego prolek R788 w dawkach do 100 mg/kg/dobę włącznie, zmniejszonych do 50 mg/dobę). kg/dzień dla kobiet po przekroczeniu MTD), silnym inhibitorem Syk, dwa razy dziennie przez 28 dni.
Oprócz standardowych ocen toksykologicznych przeprowadzono immunofenotypowanie metodą cytometrii przepływowej oraz badanie humoralnej odpowiedzi immunologicznej mierząc poziomy przeciwciał IgM i IgG anty – KLH . Inne badania immunotoksyczności obejmowały trzy modele oporności żywiciela u samic myszy Balb/c w celu dalszego ustalenia wpływu R406 na odporność wrodzoną i nabytą.
Po leczeniu R406 w badaniach na szczurach zaobserwowano oczekiwane działanie immunomodulujące (np. zmniejszenie masy grasicy i śledziony, ubytek komórek szpiku kostnego i zmniejszenie liczby limfocytów, w tym limfocytów T i B) . Zmiany te zasadniczo ustąpiły po 14-dniowym okresie rekonwalescencji bez leczenia . Prowokacja KLH u szczurów wykazała brak niekorzystnego wpływu na odpowiedź IgG lub IgM . R788/406, podawany doustnie w dawkach do 80 mg/kg/dobę włącznie przez 28 dni, nie wpływał na klirens bakterii lub wirusów odpowiednio w mysich modelach oporności u gospodarzy Listeria, paciorkowce lub grypa.
Human IgM Standards A-F |
|||
F171 | Cygnus Technologies | 1 ml | 585.6 EUR |
Mouse IgM Standards Set, A-F |
|||
F093 | Cygnus Technologies | 1 ml | 493.2 EUR |
EXOCET Standards |
|||
EXOCET-SD-1 | SBI | each | 149 EUR |
Density Standards 6ml |
|||
DEN1012 | Scientific Laboratory Supplies | PK10 | 92.4 EUR |
MRC5 Standards A-F |
|||
F373 | Cygnus Technologies | 1 ml | 585.6 EUR |
Chlorine meter standards |
|||
WAT1076 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 339.6 EUR |
Lyophilized Exosome Standards |
|||
ExoA375 | ImmunoStep | 100 μg | 364.2 EUR |
Lyophilized Exosome Standards |
|||
ExoHT29 | ImmunoStep | 100 μg | 364.2 EUR |
Lyophilized Exosome Standards |
|||
ExoMCF7 | ImmunoStep | 100 μg | 364.2 EUR |
Lyophilized Exosome Standards |
|||
ExoPC3 | ImmunoStep | 100 μg | 364.2 EUR |
Lyophilized Exosome Standards |
|||
ExoPLASMA | ImmunoStep | 100 μg | 364.2 EUR |
Lyophilized Exosome Standards |
|||
ExoUrine | ImmunoStep | 100 μg | 364.2 EUR |
CHO DNA Standards (A-H) |
|||
D553 | Cygnus Technologies | 1 ml | 386.4 EUR |
BSA Standards Set, A-E |
|||
F031 | Cygnus Technologies | 1 ml | 483.6 EUR |
HSA Standards Set, A-E |
|||
F057 | Cygnus Technologies | 1 ml | 493.2 EUR |
E.coli DNA Standards A-H |
|||
D413 | Cygnus Technologies | 1 ml | 386.4 EUR |
A549 Standards Set, A-F |
|||
F233 | Cygnus Technologies | 1 ml | 540 EUR |
Protein A Standards A-H |
|||
F743 | Cygnus Technologies | 1 ml | 493.2 EUR |
NS/0 DNA Standards (A-H) |
|||
D223 | Cygnus Technologies | 1 ml | 386.4 EUR |
NS/0 Standards Set, A-G |
|||
F223 | Cygnus Technologies | 1 ml | 585.6 EUR |
Insulin Standards Set, A-G |
|||
F043 | Cygnus Technologies | 1 ml | 585.6 EUR |
SF9 HCP Standards Set, A-H |
|||
F843 | Cygnus Technologies | 1 ml | 493.2 EUR |
CHO HCP Standards Set, A-F |
|||
F018 | Cygnus Technologies | 1.5 ml | 447.6 EUR |
BHK Cell HCP Standards A-F |
|||
F513 | Cygnus Technologies | 1 ml | 632.4 EUR |
Goat IgG Standards Set, A-F |
|||
F213 | Cygnus Technologies | 1 ml | 493.2 EUR |
E.coli HCP Standards Set, A-F |
|||
F413 | Cygnus Technologies | 1 ml | 585.6 EUR |
S.cerevisiae Standards Set, A-F |
|||
F138 | Cygnus Technologies | 1 ml | 493.2 EUR |
Mouse IgG Standards Set, A-E |
|||
F081 | Cygnus Technologies | 1 ml | 493.2 EUR |
Protein A Standards Set, A-E |
|||
F053 | Cygnus Technologies | 1 ml | 493.2 EUR |
Mouse IgG1 Standards Set, A-F |
|||
F077 | Cygnus Technologies | 1 ml | 493.2 EUR |
Protein A Standards Set, A-G |
|||
F403 | Cygnus Technologies | 1 ml | 493.2 EUR |
Mouse IgG2a Standards Set, A-F |
|||
F078 | Cygnus Technologies | 1 ml | 493.2 EUR |
Mouse IgG2b Standards Set, A-F |
|||
F079 | Cygnus Technologies | 1 ml | 493.2 EUR |
SP2/0 HCP Standards Set, A-F |
|||
F183 | Cygnus Technologies | 1 ml | 493.2 EUR |
Co2 Standards 3g/L in 2ml Amp. |
|||
SC023C | Scientific Laboratory Supplies | PK100 | 291.6 EUR |
Co2 Standards 4g/L in 2ml Amp. |
|||
SC024C | Scientific Laboratory Supplies | PK100 | 291.6 EUR |
Insulin-US Standards Set, A-F |
|||
F282 | Cygnus Technologies | 1 ml | 585.6 EUR |
Per. C6Ð’ Cell HCP Standards A-F |
|||
F533 | Cygnus Technologies | 1 ml | 540 EUR |
CHO-CM HCP Standards Set, A-G |
|||
F139 | Cygnus Technologies | 1 ml | 585.6 EUR |
Vero Cell HCP Standards Set, A-F |
|||
F503 | Cygnus Technologies | 1 ml | 540 EUR |
CAPÐ’ cell HCP Standards Set, A-H |
|||
F823 | Cygnus Technologies | 1 ml | 585.6 EUR |
P.fluorescens HCP Standards Set, A-F |
|||
F453 | Cygnus Technologies | 1 ml | 540 EUR |
Hellma(R) liquid calibration standards |
|||
Z803251-1EA | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 782.05 EUR |
Hellma Cuvette Calibration Standards Set |
|||
CEL1730 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 2542 EUR |
Set of 2 ICP Drinking Water Standards |
|||
DW-SET | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 298.8 EUR |
Pichia pastoris HCP Standards Set, A-F |
|||
F143 | Cygnus Technologies | 1 ml | 493.2 EUR |
Mettler-Toledo density standards set of |
|||
MT51325005-10EA | Scientific Laboratory Supplies | PK10 | 82.8 EUR |
Bovine Plasma Proteins Standards Set, A-F |
|||
F293 | Cygnus Technologies | 1 ml | 483.6 EUR |
Library Quantification DNA Standards (S1-S6) |
|||
20-abx098897 | Abbexa |
|
|
Pichia pastoris HCP 2G Standards Set, A-F |
|||
F643 | Cygnus Technologies | 1 ml | 540 EUR |
EPA CLP Volatiles Standards Low Concentration |
|||
CLPV-LC-A | Scientific Laboratory Supplies | 1ML | 108 EUR |
Protein A Mix-N-Go Standards Set, A-H |
|||
F603 | Cygnus Technologies | 1 ml | 632.4 EUR |
Protein A Mix-N-Go Standards Set, A-H |
|||
F613 | Cygnus Technologies | 1 ml | 632.4 EUR |
Tosoh R40/R28 Protein A Standards Set, A-H |
|||
F913 | Cygnus Technologies | 1 ml | 582 EUR |
Aliphatics Calibration Standards (20 Component Mix) |
|||
NJDEP-EPH-ALCS | Scientific Laboratory Supplies | 1ML | 216 EUR |
Purified Human C1q protein for ELISA or Standards |
|||
C1Q15-N | Alpha Diagnostics | 100 ug | 300 EUR |
Purified Human C1q protein for ELISA or Standards |
|||
C1Q15-N-1000 | Alpha Diagnostics | 1000 ug | 1000.8 EUR |
Purified, Human S100 protein for ELISA or Standards |
|||
S1002-R-100 | Alpha Diagnostics | 100 ug | 388.8 EUR |
Purified, Bovine S100 protein for ELISA or Standards |
|||
S1001-R-200 | Alpha Diagnostics | 200 ug | 388.8 EUR |
Assurance Grade Set of 38 Single-Element Standards 1000 ug/mL (1000 PPM) |
|||
ICP-KIT-1 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 2262 EUR |
LIMITED QTY-Nucleoside Standards 8-Oxo-dG (1 mg) |
|||
0801218 | Zeptometrix | 1 mg | 142.37 EUR |
LIMITED QTY-Nucleoside Standards 8-Oxo-dA (1 mg) |
|||
0801219 | Zeptometrix | 1 mg | 147.36 EUR |
Kinesis Hollow Cathode Lamp Copper Iron 37mm Standards |
|||
CHR5597 | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 419.1 EUR |
Human Adipsin/Factor D protein for ELISA or Standards |
|||
ADN15-N | Alpha Diagnostics | 5 ug | 315.6 EUR |
Set of 8 Sulfur Oil Standards in Base Oil 20 100 grams |
|||
DSS8-SET | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 757.2 EUR |
Purified Human ceruloplasmin (Cp) protein for ELISA/standards |
|||
CP15-N | Alpha Diagnostics | 100 ug | 388.8 EUR |
VAHTS Library Quantification Kit for IIIumina (DNA Standards) |
|||
NQ105 | Vazyme | 8 rxn | 432 EUR |
Green Fluorescent Proteins (GFP) protein for ELISA or Standards |
|||
GFP15-R | Alpha Diagnostics | 10 ug | 300 EUR |
Green Fluorescent Proteins (GFP) protein for ELISA or Standards |
|||
GFP15-R-100 | Alpha Diagnostics | 100 ug | 1220.4 EUR |
Set of 8 Sulfur in Oil Standards in no.2 DieselFuel 100 grams |
|||
SDFS-SET | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 838.8 EUR |
AccuBlue High Sensitivity dsDNA Standards, set of eight, 0.5 mL each |
|||
31006C | Biotium | 1KIT | 164.4 EUR |
AccuClear Ultra High Sensitivity dsDNA Quantitation Kit with 8 DNA Standards (1000 assays) |
|||
31028 | Biotium | 1kit | 434.4 EUR |
Human Paraoxonase 1 (PON) Standards QQ and RR Phenotypes (2 x 0.3 mL) |
|||
0801384 | Zeptometrix | 2 x 0.3 mL | 339 EUR |
Human Paraoxonase 1 (PON) Standards QQ and RR Phenotypes (2 x 0.3 mL) |
|||
801384 | Zeptometrix | 2 x 0.3 mL | 323 EUR |
Set of Bromide Standards for Calibration of Ion Selective Electrodes |
|||
AS-BR9-SET | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 230.4 EUR |
Set of Cyanide Standards for Calibration of Ion Selective Electrodes |
|||
RSCN9-SET | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 219.6 EUR |
Set of Fluoride Standards for Calibration of Ion Selective Electrodes |
|||
AS-F9-SET | Scientific Laboratory Supplies | EACH | 326.4 EUR |
Purified Human beta-2 microglobulin (B2M) protein for ELISA/Standards |
|||
B2M15-N | Alpha Diagnostics | 50 ug | 343.2 EUR |
Enhanced Green Fluorescent Proteins (EGFP) protein for ELISA or Standards |
|||
EGFP16-R | Alpha Diagnostics | 10 ug | 300 EUR |
Enhanced Green Fluorescent Proteins (EGFP) protein for ELISA or Standards |
|||
EGFP16-R-100 | Alpha Diagnostics | 100 ug | 927.6 EUR |
AccuBlue Broad Range dsDNA Quantitation Standards, set of nine, 0.5 mL each |
|||
31007C | Biotium | 1KIT | 164.4 EUR |
Pre-diluted BSA (bovine serum albumin) standards (750 ug/ml) for BCA Optima Protein Assay kit |
|||
BCA-BSA-750 | Alpha Diagnostics | 1 ml | 270 EUR |
LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Formamido Guanine Dimer d (PfpG) (50 µg) |
|||
0801210 | Zeptometrix | 50 µg | 142.37 EUR |
LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Formamido Cytidine Dimer d (PfpC) (50 µg) |
|||
0801211 | Zeptometrix | 50 µg | 142.37 EUR |
LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Formamido Thymine Dimer d (PfpT) (50 µg) |
|||
0801212 | Zeptometrix | 50 µg | 142.37 EUR |
LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Formamido Adenine Dimer d (PfpA) (50 µg) |
|||
0801213 | Zeptometrix | 50 µg | 142.37 EUR |
LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Thymine Glycol Cytidine Dimer d (TgpC) (50µg) |
|||
0801216 | Zeptometrix | 50µg | 142.37 EUR |
LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Thymine Glycol Guanine Dimer d (TgpG) (50 µg) |
|||
0801214 | Zeptometrix | 50 µg | 142.37 EUR |
LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Thymine Glycol Thymine Dimer d (TgpT) (50 µg) |
|||
0801215 | Zeptometrix | 50 µg | 142.37 EUR |
LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Thymine Glycol Adenine Dimer d (TgpA) (50 µg) |
|||
0801217 | Zeptometrix | 50 µg | 142.37 EUR |
Pre-diluted BSA (bovine serum albumin) standards (250, 125, 62.5, 31.25, and 0.0 ug/ml) for BCA Optima Protein Assay kit |
|||
BCA-BSA-2 | Alpha Diagnostics | 1 pk | 196.8 EUR |
BSA and BGG Stock standards (1 vial each @ 2 mg/ml) for BCA Optima Protein Assay kit |
|||
BSA-BGG-1 | Alpha Diagnostics | 1 pk | 343.2 EUR |
Recombinant (E. coli) Yellow Fluorescent Proteins (YFP) protein for ELISA or Standards (>98%) |
|||
YFP15-R | Alpha Diagnostics | 25 ug | 300 EUR |
Recombinant (E. coli) Red Fluorescent Proteins (RFP/dsRed) protein for ELISA or Standards (>98%) |
|||
RFP15-R | Alpha Diagnostics | 25 ug | 300 EUR |
Pre-diluted BSA (bovine serum albumin) standards (1 set) for BCA Optima Protein Assay kit |
|||
BCA-BSA-1 | Alpha Diagnostics | 1 pk | 196.8 EUR |
BCA Optima Protein Assay kit with Pre-diluted BSA standards and BCA Strip plates (5), 500 tests |
|||
BCAO-521 | Alpha Diagnostics | 1 kit | 270 EUR |
Pre-diluted BGG (bovine gamma globulin) standards (1 set: 2000, 1000, 500, 125, 62.5, 31.25, and 0 ng/ml BGG) for BCA Optima Protein Assay kit |
|||
BCA-BGG-1 | Alpha Diagnostics | 1 pk | 196.8 EUR |
BCA Optima Protein Assay kit with Pre-diluted BGG (bovine gamma globulin) standards and BCA Strip plates (5), 500 tests |
|||
BCAO-522 | Alpha Diagnostics | 1 kit | 270 EUR |
Additional Standard-Size Cuvettes, pack of 2 |
|||
NS1000-C | Benchmark Scientific | 1 each | 52.5 EUR |
Rat Urinary Protein Assay Standard |
|||
90401 | Chondrex | 4 mg/ml x 1.5 ml | 157.44 EUR |
Korelowało to z wcześniejszymi testami funkcji makrofagów i neutrofili in vitro (ocena jonów migrujących, fagocytozy, wybuchu oksydacyjnego i aktywności bakteriobójczej), które wykazały, że R406 nie wpływa niekorzystnie na funkcję makrofagów lub neutrofili we wrodzonych odpowiedziach immunologicznych. Podsumowując, wyniki te pokazują , że R406 ma minimalną funkcjonalną immunotoksyczność pomimo jego działania limfocytopenicznego, co sugeruje, że hamowanie Syk może nie prowadzić do niedopuszczalnych działań niepożądanych opartych na mechanizmach.