Ocena immunotoksyczności dla nowego inhibitora kinazy tyrozynowej śledziony R406.

    • Kinaza tyrozynowa Cdna 8Spleen (Syk) to nowy cel farmaceutyczny w leczeniu chorób alergicznych, autoimmunologicznych i nowotworowych. Wcześniejsze badania wykazały, że sygnalizacja Syk odgrywa kluczową rolę w regulacji układu limfohematopoetycznego.
    • Obserwacje te skłoniły nas do zbadania, czy hamowanie Syk będzie promować immunotoksyczność. W serii badań  szczurom  podawano doustnie R406 w dawkach do 100 mg/kg/dobę włącznie (lub jego prolek R788 w dawkach do 100 mg/kg/dobę włącznie, zmniejszonych do 50 mg/dobę). kg/dzień dla kobiet po przekroczeniu MTD), silnym inhibitorem Syk, dwa razy dziennie przez 28 dni.
    • Oprócz  standardowych  ocen toksykologicznych przeprowadzono immunofenotypowanie metodą cytometrii przepływowej oraz badanie humoralnej odpowiedzi immunologicznej mierząc  poziomy przeciwciał IgM  i IgG anty – KLH .  Inne badania immunotoksyczności obejmowały trzy modele oporności żywiciela u samic myszy Balb/c w celu dalszego ustalenia wpływu R406 na odporność wrodzoną i nabytą.
    • Po leczeniu R406 w badaniach na szczurach zaobserwowano oczekiwane działanie immunomodulujące (np. zmniejszenie masy grasicy i śledziony, ubytek komórek szpiku kostnego i zmniejszenie liczby limfocytów, w tym limfocytów T i B)   .
    • Zmiany te zasadniczo ustąpiły podczas 14-dniowego okresu rekonwalescencji bez leczenia. Prowokacja  KLH  u  szczurów  wykazała brak niekorzystnego wpływu na odpowiedź IgG lub  IgM  . R788/406, podawany doustnie w dawkach do 80 mg/kg/dobę włącznie przez 28 dni, nie wpływał na klirens bakterii lub wirusów odpowiednio w mysich modelach oporności u gospodarzy Listeria, paciorkowce lub grypa.
    • Korelowało to z wcześniejszymi testami funkcji makrofagów i neutrofili in vitro (ocena jonów migrujących, fagocytozy, wybuchu oksydacyjnego i aktywności bakteriobójczej), które wykazały, że R406 nie wpływa niekorzystnie na funkcję makrofagów lub neutrofili we wrodzonych odpowiedziach immunologicznych.
    • Podsumowując, wyniki te pokazują , że R406 ma minimalną funkcjonalną immunotoksyczność pomimo jego działania limfocytopenicznego, co sugeruje, że hamowanie Syk może nie prowadzić do niedopuszczalnych działań niepożądanych opartych na mechanizmach.

 

Aby przetestować możliwość, że IL-10 działa jako autokrynny lub parakrynny czynnik wzrostu dla komórek B Ly-1, leczyliśmy myszy nieprzerwanie od urodzenia do 8 tygodnia życia monoklonalnym  szczurzym  przeciwciałem IgM  , które specyficznie neutralizuje mysią IL-10. Myszy leczone w ten sposób pozbawione były komórek Ly-1 B rezydujących w otrzewnej, zawierały znacznie obniżone poziomy immunoglobulin M w surowicy i nie były w stanie wytworzyć znaczących odpowiedzi przeciwciał in vivo  na wstrzyknięcia dootrzewnowe alfa 1,3-dekstranu lub fosforylocholiny,  anty genów, dla których specyficzne komórki B znajdują się w podzbiorze komórek B Ly-1.

W przeciwieństwie do tego, konwencjonalne komórki B śledziony  myszy traktowanych anty -IL-10 były prawidłowe pod względem całkowitej liczby, fenotypu i odpowiedzi in vitro na mitogeny komórek B i zależną od grasicy  antygen trinitrofenylo-hemocyjaninę skałoczepa (TNP- KLH ). ).

Mechanizm deplecji limfocytów B Ly-1 wydaje się być związany z podwyższeniem poziomów endogennego interferonu gamma (IFN-gamma) u  myszy leczonych anty-IL-10, ponieważ współadministrowali neutralizujące przeciwciała  anty-IFN-gamma subst anty  IL-  10 . alli przywrócił liczbę limfocytów B Ly-1 rezydujących w otrzewnej u tych myszy. Wyniki te sugerują, że IL-10 jest regulatorem rozwoju limfocytów B Ly-1 i identyfikują procedurę specyficznego zubażania limfocytów B Ly-1, umożliwiając w ten sposób dalszą ocenę roli tych komórek w układzie odpornościowym.

Ocena immunotoksyczności dla nowego inhibitora kinazy tyrozynowej śledziony R406.

Kinaza tyrozynowa śledziony (Syk) to nowy cel farmaceutyczny w leczeniu schorzeń alergicznych, autoimmunologicznych i nowotworowych. Wcześniejsze badania wykazały, że sygnalizacja Syk odgrywa kluczową rolę w regulacji układu limfohematopoetycznego. Obserwacje te skłoniły nas do zbadania, czy hamowanie Syk będzie promować immunotoksyczność.

W serii badań  szczurom  podawano doustnie R406 w dawkach do 100 mg/kg/dobę włącznie (lub jego prolek R788 w dawkach do 100 mg/kg/dobę włącznie, zmniejszonych do 50 mg/dobę). kg/dzień dla kobiet po przekroczeniu MTD), silnym inhibitorem Syk, dwa razy dziennie przez 28 dni.

Oprócz standardowych ocen toksykologicznych przeprowadzono immunofenotypowanie metodą cytometrii przepływowej oraz badanie humoralnej odpowiedzi immunologicznej mierząc  poziomy przeciwciał IgM  i IgG anty – KLH .  Inne badania immunotoksyczności obejmowały trzy modele oporności żywiciela u samic myszy Balb/c w celu dalszego ustalenia wpływu R406 na odporność wrodzoną i nabytą.

Po leczeniu R406 w badaniach na szczurach zaobserwowano oczekiwane działanie immunomodulujące (np. zmniejszenie masy grasicy i śledziony, ubytek komórek szpiku kostnego i zmniejszenie liczby limfocytów, w tym limfocytów T i B)   . Zmiany te zasadniczo ustąpiły po 14-dniowym okresie rekonwalescencji bez leczenia . Prowokacja  KLH  u  szczurów  wykazała brak niekorzystnego wpływu na odpowiedź IgG lub  IgM  . R788/406, podawany doustnie w dawkach do 80 mg/kg/dobę włącznie przez 28 dni, nie wpływał na klirens bakterii lub wirusów odpowiednio w mysich modelach oporności u gospodarzy Listeria, paciorkowce lub grypa.

Human IgM Standards A-F

F171 Cygnus Technologies 1 ml 585.6 EUR

Mouse IgM Standards Set, A-F

F093 Cygnus Technologies 1 ml 493.2 EUR

EXOCET Standards

EXOCET-SD-1 SBI each 149 EUR

Density Standards 6ml

DEN1012 Scientific Laboratory Supplies PK10 92.4 EUR

MRC5 Standards A-F

F373 Cygnus Technologies 1 ml 585.6 EUR

Chlorine meter standards

WAT1076 Scientific Laboratory Supplies EACH 339.6 EUR

Lyophilized Exosome Standards

ExoA375 ImmunoStep 100 μg 364.2 EUR

Lyophilized Exosome Standards

ExoHT29 ImmunoStep 100 μg 364.2 EUR

Lyophilized Exosome Standards

ExoMCF7 ImmunoStep 100 μg 364.2 EUR

Lyophilized Exosome Standards

ExoPC3 ImmunoStep 100 μg 364.2 EUR

Lyophilized Exosome Standards

ExoPLASMA ImmunoStep 100 μg 364.2 EUR

Lyophilized Exosome Standards

ExoUrine ImmunoStep 100 μg 364.2 EUR

CHO DNA Standards (A-H)

D553 Cygnus Technologies 1 ml 386.4 EUR

BSA Standards Set, A-E

F031 Cygnus Technologies 1 ml 483.6 EUR

HSA Standards Set, A-E

F057 Cygnus Technologies 1 ml 493.2 EUR

E.coli DNA Standards A-H

D413 Cygnus Technologies 1 ml 386.4 EUR

A549 Standards Set, A-F

F233 Cygnus Technologies 1 ml 540 EUR

Protein A Standards A-H

F743 Cygnus Technologies 1 ml 493.2 EUR

NS/0 DNA Standards (A-H)

D223 Cygnus Technologies 1 ml 386.4 EUR

NS/0 Standards Set, A-G

F223 Cygnus Technologies 1 ml 585.6 EUR

Insulin Standards Set, A-G

F043 Cygnus Technologies 1 ml 585.6 EUR

SF9 HCP Standards Set, A-H

F843 Cygnus Technologies 1 ml 493.2 EUR

CHO HCP Standards Set, A-F

F018 Cygnus Technologies 1.5 ml 447.6 EUR

BHK Cell HCP Standards A-F

F513 Cygnus Technologies 1 ml 632.4 EUR

Goat IgG Standards Set, A-F

F213 Cygnus Technologies 1 ml 493.2 EUR

E.coli HCP Standards Set, A-F

F413 Cygnus Technologies 1 ml 585.6 EUR

S.cerevisiae Standards Set, A-F

F138 Cygnus Technologies 1 ml 493.2 EUR

Mouse IgG Standards Set, A-E

F081 Cygnus Technologies 1 ml 493.2 EUR

Protein A Standards Set, A-E

F053 Cygnus Technologies 1 ml 493.2 EUR

Mouse IgG1 Standards Set, A-F

F077 Cygnus Technologies 1 ml 493.2 EUR

Protein A Standards Set, A-G

F403 Cygnus Technologies 1 ml 493.2 EUR

Mouse IgG2a Standards Set, A-F

F078 Cygnus Technologies 1 ml 493.2 EUR

Mouse IgG2b Standards Set, A-F

F079 Cygnus Technologies 1 ml 493.2 EUR

SP2/0 HCP Standards Set, A-F

F183 Cygnus Technologies 1 ml 493.2 EUR

Co2 Standards 3g/L in 2ml Amp.

SC023C Scientific Laboratory Supplies PK100 291.6 EUR

Co2 Standards 4g/L in 2ml Amp.

SC024C Scientific Laboratory Supplies PK100 291.6 EUR

Insulin-US Standards Set, A-F

F282 Cygnus Technologies 1 ml 585.6 EUR

Per. C6Ð’ Cell HCP Standards A-F

F533 Cygnus Technologies 1 ml 540 EUR

CHO-CM HCP Standards Set, A-G

F139 Cygnus Technologies 1 ml 585.6 EUR

Vero Cell HCP Standards Set, A-F

F503 Cygnus Technologies 1 ml 540 EUR

CAPÐ’ cell HCP Standards Set, A-H

F823 Cygnus Technologies 1 ml 585.6 EUR

P.fluorescens HCP Standards Set, A-F

F453 Cygnus Technologies 1 ml 540 EUR

Hellma(R) liquid calibration standards

Z803251-1EA Scientific Laboratory Supplies EACH 782.05 EUR

Hellma Cuvette Calibration Standards Set

CEL1730 Scientific Laboratory Supplies EACH 2542 EUR

Set of 2 ICP Drinking Water Standards

DW-SET Scientific Laboratory Supplies EACH 298.8 EUR

Pichia pastoris HCP Standards Set, A-F

F143 Cygnus Technologies 1 ml 493.2 EUR

Mettler-Toledo density standards set of

MT51325005-10EA Scientific Laboratory Supplies PK10 82.8 EUR

Bovine Plasma Proteins Standards Set, A-F

F293 Cygnus Technologies 1 ml 483.6 EUR

Library Quantification DNA Standards (S1-S6)

20-abx098897 Abbexa
  • 744.00 EUR
  • 744.00 EUR
  • 744.00 EUR
  • 744.00 EUR
  • 25%, 120 ul
  • 37.5%, 120 ul
  • 50%, 120 ul
  • 62.5%, 120 ul

Pichia pastoris HCP 2G Standards Set, A-F

F643 Cygnus Technologies 1 ml 540 EUR

EPA CLP Volatiles Standards Low Concentration

CLPV-LC-A Scientific Laboratory Supplies 1ML 108 EUR

Protein A Mix-N-Go Standards Set, A-H

F603 Cygnus Technologies 1 ml 632.4 EUR

Protein A Mix-N-Go Standards Set, A-H

F613 Cygnus Technologies 1 ml 632.4 EUR

Tosoh R40/R28 Protein A Standards Set, A-H

F913 Cygnus Technologies 1 ml 582 EUR

Aliphatics Calibration Standards (20 Component Mix)

NJDEP-EPH-ALCS Scientific Laboratory Supplies 1ML 216 EUR

Purified Human C1q protein for ELISA or Standards

C1Q15-N Alpha Diagnostics 100 ug 300 EUR

Purified Human C1q protein for ELISA or Standards

C1Q15-N-1000 Alpha Diagnostics 1000 ug 1000.8 EUR

Purified, Human S100 protein for ELISA or Standards

S1002-R-100 Alpha Diagnostics 100 ug 388.8 EUR

Purified, Bovine S100 protein for ELISA or Standards

S1001-R-200 Alpha Diagnostics 200 ug 388.8 EUR

Assurance Grade Set of 38 Single-Element Standards 1000 ug/mL (1000 PPM)

ICP-KIT-1 Scientific Laboratory Supplies EACH 2262 EUR

LIMITED QTY-Nucleoside Standards 8-Oxo-dG (1 mg)

0801218 Zeptometrix 1 mg 142.37 EUR

LIMITED QTY-Nucleoside Standards 8-Oxo-dA (1 mg)

0801219 Zeptometrix 1 mg 147.36 EUR

Kinesis Hollow Cathode Lamp Copper Iron 37mm Standards

CHR5597 Scientific Laboratory Supplies EACH 419.1 EUR

Human Adipsin/Factor D protein for ELISA or Standards

ADN15-N Alpha Diagnostics 5 ug 315.6 EUR

Set of 8 Sulfur Oil Standards in Base Oil 20 100 grams

DSS8-SET Scientific Laboratory Supplies EACH 757.2 EUR

Purified Human ceruloplasmin (Cp) protein for ELISA/standards

CP15-N Alpha Diagnostics 100 ug 388.8 EUR

VAHTS Library Quantification Kit for IIIumina (DNA Standards)

NQ105 Vazyme 8 rxn 432 EUR

Green Fluorescent Proteins (GFP) protein for ELISA or Standards

GFP15-R Alpha Diagnostics 10 ug 300 EUR

Green Fluorescent Proteins (GFP) protein for ELISA or Standards

GFP15-R-100 Alpha Diagnostics 100 ug 1220.4 EUR

Set of 8 Sulfur in Oil Standards in no.2 DieselFuel 100 grams

SDFS-SET Scientific Laboratory Supplies EACH 838.8 EUR

AccuBlue High Sensitivity dsDNA Standards, set of eight, 0.5 mL each

31006C Biotium 1KIT 164.4 EUR

AccuClear Ultra High Sensitivity dsDNA Quantitation Kit with 8 DNA Standards (1000 assays)

31028 Biotium 1kit 434.4 EUR

Human Paraoxonase 1 (PON) Standards QQ and RR Phenotypes (2 x 0.3 mL)

0801384 Zeptometrix 2 x 0.3 mL 339 EUR

Human Paraoxonase 1 (PON) Standards QQ and RR Phenotypes (2 x 0.3 mL)

801384 Zeptometrix 2 x 0.3 mL 323 EUR

Set of Bromide Standards for Calibration of Ion Selective Electrodes

AS-BR9-SET Scientific Laboratory Supplies EACH 230.4 EUR

Set of Cyanide Standards for Calibration of Ion Selective Electrodes

RSCN9-SET Scientific Laboratory Supplies EACH 219.6 EUR

Set of Fluoride Standards for Calibration of Ion Selective Electrodes

AS-F9-SET Scientific Laboratory Supplies EACH 326.4 EUR

Purified Human beta-2 microglobulin (B2M) protein for ELISA/Standards

B2M15-N Alpha Diagnostics 50 ug 343.2 EUR

Enhanced Green Fluorescent Proteins (EGFP) protein for ELISA or Standards

EGFP16-R Alpha Diagnostics 10 ug 300 EUR

Enhanced Green Fluorescent Proteins (EGFP) protein for ELISA or Standards

EGFP16-R-100 Alpha Diagnostics 100 ug 927.6 EUR

AccuBlue Broad Range dsDNA Quantitation Standards, set of nine, 0.5 mL each

31007C Biotium 1KIT 164.4 EUR

Pre-diluted BSA (bovine serum albumin) standards (750 ug/ml) for BCA Optima Protein Assay kit

BCA-BSA-750 Alpha Diagnostics 1 ml 270 EUR

LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Formamido Guanine Dimer d (PfpG) (50 µg)

0801210 Zeptometrix 50 µg 142.37 EUR

LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Formamido Cytidine Dimer d (PfpC) (50 µg)

0801211 Zeptometrix 50 µg 142.37 EUR

LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Formamido Thymine Dimer d (PfpT) (50 µg)

0801212 Zeptometrix 50 µg 142.37 EUR

LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Formamido Adenine Dimer d (PfpA) (50 µg)

0801213 Zeptometrix 50 µg 142.37 EUR

LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Thymine Glycol Cytidine Dimer d (TgpC) (50µg)

0801216 Zeptometrix 50µg 142.37 EUR

LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Thymine Glycol Guanine Dimer d (TgpG) (50 µg)

0801214 Zeptometrix 50 µg 142.37 EUR

LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Thymine Glycol Thymine Dimer d (TgpT) (50 µg)

0801215 Zeptometrix 50 µg 142.37 EUR

LIMITED QTY-Dinucleotide Standards Thymine Glycol Adenine Dimer d (TgpA) (50 µg)

0801217 Zeptometrix 50 µg 142.37 EUR

Pre-diluted BSA (bovine serum albumin) standards (250, 125, 62.5, 31.25, and 0.0 ug/ml) for BCA Optima Protein Assay kit

BCA-BSA-2 Alpha Diagnostics 1 pk 196.8 EUR

BSA and BGG Stock standards (1 vial each @ 2 mg/ml) for BCA Optima Protein Assay kit

BSA-BGG-1 Alpha Diagnostics 1 pk 343.2 EUR

Recombinant (E. coli) Yellow Fluorescent Proteins (YFP) protein for ELISA or Standards (>98%)

YFP15-R Alpha Diagnostics 25 ug 300 EUR

Recombinant (E. coli) Red Fluorescent Proteins (RFP/dsRed) protein for ELISA or Standards (>98%)

RFP15-R Alpha Diagnostics 25 ug 300 EUR

Pre-diluted BSA (bovine serum albumin) standards (1 set) for BCA Optima Protein Assay kit

BCA-BSA-1 Alpha Diagnostics 1 pk 196.8 EUR

BCA Optima Protein Assay kit with Pre-diluted BSA standards and BCA Strip plates (5), 500 tests

BCAO-521 Alpha Diagnostics 1 kit 270 EUR

Pre-diluted BGG (bovine gamma globulin) standards (1 set: 2000, 1000, 500, 125, 62.5, 31.25, and 0 ng/ml BGG) for BCA Optima Protein Assay kit

BCA-BGG-1 Alpha Diagnostics 1 pk 196.8 EUR

BCA Optima Protein Assay kit with Pre-diluted BGG (bovine gamma globulin) standards and BCA Strip plates (5), 500 tests

BCAO-522 Alpha Diagnostics 1 kit 270 EUR

Additional Standard-Size Cuvettes, pack of 2

NS1000-C Benchmark Scientific 1 each 52.5 EUR

Rat Urinary Protein Assay Standard

90401 Chondrex 4 mg/ml x 1.5 ml 157.44 EUR

Korelowało to z wcześniejszymi testami funkcji makrofagów i neutrofili in vitro (ocena jonów migrujących, fagocytozy, wybuchu oksydacyjnego i aktywności bakteriobójczej), które wykazały, że R406 nie wpływa niekorzystnie na funkcję makrofagów lub neutrofili we wrodzonych odpowiedziach immunologicznych. Podsumowując, wyniki te pokazują , że R406 ma minimalną funkcjonalną immunotoksyczność pomimo jego działania limfocytopenicznego, co sugeruje, że hamowanie Syk może nie prowadzić do niedopuszczalnych działań niepożądanych opartych na mechanizmach.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany. Wymagane pola są oznaczone *